了解一下MDA的测量方法
一:原理
丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标,在酸性和高温度条件下,可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3,5,5-三甲基恶唑-2,4-二酮),其最大吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰,其中最主要的是可溶性糖,糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm,但532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加,因此测定植物组织中MDA—TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532、450nm处的消光度值,所以在蔗糖、MDA与TBA显色反应中需一定量的铁离子,通常植物组织中铁离子的含量为每克千重100—300ug/g,根据植物样品量和提取液的体积,加入Fe3+的终浓度为0.5umol/L。
二:试剂
1:质量分数为10%三氯乙酸(TCA);
2:质量分数0.6%硫代巴比妥酸:先加少量的氢氧化钠(1mol·L-1)溶解,再用10%的三氯乙酸定容;
三:方法
1:MDA的提取 称取剪碎的试材1g,加入2mll0%TCA和少量石英砂,研磨至匀浆,再加8mlTCA研磨,匀浆在4000r/min离心10min,上清液为样品提取液。
2:显色反应和测定 吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水),加入2ml0.6%TBA溶液,混匀物于沸水浴上反应15min,迅速冷却后再离心。取上清液测定532、600和450nm波长下的消光度。
四:结果
C1=11.71D450
C2={6.45(D532 - D600) - 0.56D450}NW-1
C1——可溶性糖的浓度(mmol/L)
C2——MDA的浓度(·umol/L)
D450、0532、D600分别代表450、532和600nm波长下的消光度值。
N:提取液总体积(ml)
W:植物组织鲜重